BCP 배지 만들기 및 유산균 분리배양 (1)

이번포스팅에선는 BCP배지를 만들어서 요구르트의 유산균을 분리배양한는 실험을 보여드리겠습니다.

 

 

1) 준비물

 

bcp agar

 

 

 

 

Agar, powder

 

 

 

메스실린더,삼각플라스크,시험관

 

 

 

전자저울

 

마이크로피펫,팁, 요구르트

 

 

 

 

 

 

2)실험내용

BCP배지를 이용하여 고체배지를 만들고 그 고체배지에 생리식염수와 요구르트를 9:1 비율로섞어 10의-1승부터 -8승까지의 시험관을 제조하여 -5,-6,-7,-8까지 희석한 4개의 시험관에서 1ml씩 마이크로피펫으로 채취 후 각 배지에 접종하고 배양기에 넣어 배양시킨 후 결과를 관찰합니다

 

이번실험에선는 증류수 300ml에 bcp배지 7.38g +agar 0.9g을 혼합하여 고체배지를 만들었습니다.

 

 

 

 

 

 

 

3)실험과정

 

먼저 Agar powder의 무게를 칭량합니다

 

 

0.9g을 칭량하는데 이는 bpc배지를 7.38g 채취해서, bcp배지의 1.5~2%의 agar를 첨가해야 하기때문입니다

 

고체배지란? : 액체 배지에 한천,젤라틴 등을 첨가하여 굳힌 것으로 미생물의 보존배양, 순수분리등에 사용한다.고형제로 한천을 사용할 경우에는 배지의 양에 1.5~2%의 순수 한천을 첨가하여 사용한다 (반고체배지의경우는 0.6%정도를 사용)

 

 

매스실린더에 300ml의 증류수를 떠온상태에서 먼저 삼각플라스크에 그 300ml중 일부를 미리옮겨 준 후 agar를 넣습니다

 

 

bcp배지 7.38g을 칭량합니다

 

 

무게를 잰 bcp배지를 삼각플라스크에 넣어준 후 메스실린더에 든 나머지 증류수를 다 삼각플라스크에 담아줍니다

 

 

그리고 삼각플라스크 위에 파라필름이나 뚜껑을 닫아 섞어주고 고압증기멸균을 준비합니다

 

 

위에 보이는 이미지는 고압증기멸균기 autoclave이다 여기에 삼각플라스크를 넣고 닫아 121도에 15분간 멸균을 시킬겁니다

 

 

먼저 기기아래바닥에 물기가 있는지 확인해야합니다

물기가 없다면 찰랑찰랑할 정도로 증류수를 부어 줘야합니다

 

 

 

121도로 15분으로 타임을 세팅한고 (처음엔 28도부터 시간이지날수록 121도 세팅값에 도달하면 그때부터 알아서 15분간 멸균후 작동이 정지된다)

 

 

삼각플라스크 위에 호일로 감아서 입구를 막아준 후

 

 

기기 안에 이렇게 넣습니다

 

 

뚜껑을 닫기전에는 킴테크로 뚜껑 주위를 닦고

 

 

 

뚜껑 아래부분도 닦아 오염을 예방할 수 있습니다

 

 

 

멸균기를 닫고 잠가줍니다

 

 

 

압력밸브도 잠겼는지 확인을 해야합니다

 

 

 

 

 

 

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기기가 작동되고 압력이 다 빠질때까지 미리 준비한 요구르트에서 1ml를  마이크로피펫으로 채취후 9ml의 생리식염수가 든 시험관에 옮깁니다

 

그럼 10의 -1승의 주입시료가 완성되고 이를 -8승까지 진행합니다

 

 

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완료를 하면 이렇게 끝에 다다를수록 요구르트의 색은 찾아보기 힘듭니다

 

 

 

 

이후 시간이 지나서 autoclave의 작동이 완료되면 앞서 말했듯이 바로열지말고 압력게이지가 0으로 되면 그때 뚜껑을 열어 배지를 꺼내줍니다

 

 

 

 

 

 

 

멸균이 완료된 고체배지를 클린벤치에 가져오고

 

 

페트리접시를 클린벤치 안에서 개봉하여 준비한 후

 

멸균된 배지가든 삼각플라스크에 호일을 제거하고 입구부분을 화염멸균합니다

 

준비된 페트리접시에 장감을낀채로 조심히 접시높이의 1/3정도 부어줍니다

 

부어준 페트리디쉬는 뚜껑을 살짝 걸친채로 방치한뒤 굳기를 기다립니다

 

 

 

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배지가 다 굳어 고체배지가 되면 미리 준비한 희석된 요구르트시액을 마이크로피펫으로 100㎍ 채취하고

 

 

고체배지에 접종합니다

 

 

그리고 화염멸균한 유리봉을 이용해  요구르트 속 유산균을 분산도말해야합니다

 

삼각유리봉으로 분산도말하는 방법

1.삼각유리봉에 알코올을 묻힌다

2.삼각유리봉에 불을 붙힌다.

3.불이 꺼질때 까지 기다린 후 식힌다

4.위의 그림과 같이 배지 가장자리에 살짝 가져가 천천히 식힌다

5.균이 접종된 배지 위를 유리봉으로 문질러 골고루 균을 퍼트려준다

6.배지가 꾸덕뚜덕해질때 까지 문지른다

7.사용한 삼각유리봉은 다시 멸균하여 보관한다

 

 

위와같이 계속 돌려가며 문질러주면.

굳을때 느낌이 옵니닼ㅋㅋㅋㅋㅋㅋㅋ

 

 

다굳은 접종한 페트리접시들을 모아서 유산균이 잘 배양되는 온도로 세팅 후

 

 

랩에감싸서 배양기안에 넣고 기다리면 됩니다

 

 

결과는 3일정도기다린후 확인해야해서 다음포스팅에 올리겠습니다!